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24.（10分）25.（12分）甲、乙两种单基因遗传病分别由等位基因A/a、B/b控制。图1为这两种遗传病家白桦是我国东北地区重要的绿化树种，土壤盐渍化严重制约其生长，而BpMYB5基族的系谱图。甲病患者的卵母细胞在受精后会发生凋亡，从而导致女性不孕症；基因检因是调控白桦耐盐性的关键基因。为验证该基因的耐盐功能，研究人员利用无缝克隆技测发现个体I-2不含致病基因。不考虑X、Y同源区段，也不考虑其他的变异，请回答术，将BpMYB5基因与绿色荧光蛋白（eGFP）基因融合，构建了pBI121-BpMYB5-cGFP过表达载体，开展相关实验研究。下列问题：断开位点一无子代产生引物1：引物2忠甲病女KanR终止子电乙纳男引物3引物4PCRBpMYB5基因启动子正常男女线性化eGFP基因PBI121KanR装载体性状未知质粒无缝\T-DNA、终止子男女未知TetR克隆农杆菌图FPCTetR②白桦树（1）据图1可知，控制甲病的基因为（显性/隐性·基因；判断依据BpMYB5基因RPBI121-BpMYB5-eGFP软体是线（2）下图2为B/b基因上限制酶M的识别位点及该家族中部分个体的B/b基因经eGFP基因R注：kanR为卡那霉素抗性基因，TetR为四环素抗性基因。限制酶M切割后得到对应的电泳条带，据图分析基因②为（B/b）基因。乙病（1）①过程是利用PCR技术将质粒线性化，进行PCR扩增质粒时，需要质粒、引内的遗传方式为。Ⅲ-2只患乙病的概率是物、、含Mg的缓冲液和耐高温的DNA聚合酶：该过程中引I物应选择同时患甲、乙两种遗传病的概率为耐高温的DNA聚合酶在PCR的步骤中起作用。1-31--6-7不（2）为确保BpMYB5基因与eGFP基因融合后能成功构建融合基因，并表达出完整限制M的识别位点1.21b的融合蛋白，在引物设计时，应去除（单选）。蓝因①0.81b要时基因②A.BpMYB5基因中编码起始密码子的序列B.BpMYB5基因中编码终止密码子的序列0.6kb手Q.4kbC.eGFP基因中编码起始密码子的序列D.eGFP基因中编码终止密码子的序列图2答则（3）科研人员用绿色荧光探针标记A基因的核酸序列，红色荧光探针标记a基因线为起始密码子，UAG、UAA、UGA为终止密码子）。为实现二者的无缝克隆且保证融合的核酸序列，再在人工扩增DNA体系中加入荧光标记物。检测时，随着扩增次数增蛋白的正常表达，图中引物R的设计至关重要，该引物的碱基序列应为5'--3'。题负多，相应的荧光信号逐渐增强。图3中的a、b、c是人工扩增DNA后可能的荧光检测BpMYB5基因序列S'-AATGCCTAGT......GTGTTTTAGCAT-3结果，家系中Ⅱ-2对应的结果为ⅡI-5对应的结果为eGFP基因序列5'-CATGTCCAGC......AACCCATAACCA-3'红色荧光（4）实验人员将重组的pBI121-BpMYB5-eGFP载体（Ti质粒）通过法侵染经绿色荧光信号强度信号强度信号强度绿色荧光消毒后的白桦种子，为筛选出成功导入重组质粒的白桦种子，培养基上需要添加红色荧光（5）将筛选得到的转基因种子经培养可获得转基因白桦植株，通过观察以了解红色荧光绿色荧光BpMYB5基因的表达水和表达部位。0循环数循环数循环数8b（6）若将pBI121-BpMYB5-eGFP过表达载体导入白桦细胞后，培育出的转基因白桦图3植株耐盐性未明显增强，请结合题干实验情景，分析可能的原因（答出一点即可）。高三一模生物第11页（共12页）高三一模生物第12页（共12页）