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21.(14分)程非性由等抑制高如图为转B春素蛋白基因棉花的培育过程示意侧，解图回答下列问感互换，Hind Ill、BamH IamH I Hind III BamHT-DNA-LB穿梭质粒T-DNA-RB利用②棉花植株DNA连接酶服可S可武0组织培养p35s④棉花叶圆片p35s目的基因重组T-DNA-LB农杆菌共培养、转化小中穿梭质粒辅助质粒通③导入KanR佛○@所T-DNA-RBOri遗注：T-DNA-LB表示左边界，TDNA-RB表示右边界，Or:表示复制原点；Kam表示卡那霉素抗性基因；HgBR表示潮霉素B抗性基因。(1)PCR扩增目的基因时，需要模板DNA、引物、和耐高温的DNA聚合酶，并在含Mg的缓冲液中进行反应。DNA聚合酶在PCR的的甲步骤中起作用；同用Hind、BamH I酶切穿梭质粒和带目的基因的D,这秤双酶切的优势在于避免(2)研究人员一般先用处理农杆菌细胞，然后再将重组穿梭质粒导入其细胞中。在农杆菌细胞内辅助质粒表达的多种Vr蛋白，可以协助带有目的基因的T-DNA导人植物细胞，并防止植物细胞中对TDNA的降解。(3)根据图中重组穿梭质粒上KanR和HygBR两个标记基因的位置，可以用初步筛选转化的棉花愈伤组织。(4)培育的转基因抗虫棉花是否成功，最简便的检测方法是0(5)简并PCR可以检测复杂样本中低丰度转基因核酸，对转基因作物风险防控至关重要。简并引物可与多种相似序列结合，其简并度为简并核苷酸代码对应的碱基种类数相乘得到的。若某引物序列为5一AYGNYCGTTYANATYYGT一3'（已知简并核苷酸代码Y=C/T;N=A/C/GT)则其简并度为。针对高度保守区域，需要(填降傅”或升高”)引物的简并度以提高特异性。责女最背箱献启册合龄：大新更部面箱西前隆，万港于奥重显的家册量血脚特于以，卧临四你的《生物学第8页（共8页）学赠