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eme mber25。(2分)研究表明：Y氨基T酸(GABA)是人体大脑皮层主要的抑制性神经遥质，在疾颗治疗为面具有重要的应用价值。谷氨酸脱段酶(GB)可以催化L谷氨酸反应合成r氨基丁酸，但来源于野生型的菌株的内源性GdB的活力均较低。骑酸啡哆醛合酶基因5O1(675p)和S☑1(894p)的蛋白质产物具有催化合成磷酸毗哆醛的能力。当SN01和s71国时表达时，能笔影@复合物，从而提高CB活性，单独表达时不能形成相应的复合物。某研究小组通过以验步骤，尝试实现Y氨基丁酸的高效单产。回答下列向题:步骤1：利用原始质粒A构建重组质粒B和重组质粒C(图1)Neol (265bp启动子2pKp I (286bp)启动子126p启动子GadB基因pm11706bp)GadB基因I(170bp)Xba l (297bp)SNO1基因止子终止子BamH I (2393bp)4176bSNZI基因复制原终止子xba13299%p复制原点复制原点重组质粒C原始质粒A重组质粒B图1《在eaI,nI、BamH I、XbaI为限制酶切位点(1)已知Gad男基因1400bp)的α链为转录的模板链，测得该链首端到末端的序列为5'-ATCTACECGCTCATCCC.....CGCAGCAATGACTAGCG-3'。利用PCR获取目的基因时，C反意体系需要加人缓冲液模板刀以、引物、等物质。某同学设计了如下4种你引物，其中可选用的引物是Q4填序号)。D5'-CGGATGAGCGCGTAGAT-3'5-ATCTACGCGCTCATCCG-3'装35'-CGCAGCAATGAGTAGCG-3'5'-CGCTACTCATTGCTGCG-3'①(2)据图1分析，利用PCR扩指目的基因时，设计GadB的物时，需要在引物_（填序号)的5'端添加限制酶0L识别序列，在引物（（填序号）的5'端添加限制酶L识别序列，从而可以更好的构建重组顾粒B,并确保GadB基因的正确连接。步骤2：利用单酶切法结合凝胶电泳初步鉴宠重组质粒是否构建成功(3)利用N0【切割3种质粒后，琼脂糖凝胶电泳结果如图2所示。据图2结果分析，图示中泳道3M23是质粒填“A”“》或”)的单酶切结果。bpM112步骤3：4个菌株发酵产Y氨基了酸能力的比较-100005000-5000实验中所用到的菌株如下：R1(原始菌株)，2（某些特定基30002500因敲除菌株)，R3(将重组质粒B导入2的重组菌株)，R42000-2000(将重组质粒C导人2的重组菌株)。1500-1500(4)通过高效液相色谱法检测4个菌株发酵液中Y氨基丁酸含量，数据显示基因敲除菌(R2)的发酵液中Y氨基1000-1000丁酸的含量相对于原始菌株R1提高了4.2倍。据此推测，敲除的基因的功能是图2(5)结果显示4个菌株中产y氨基丁酸能力最强的是菌株3，菌株4发酵液中Y-氨基丁酸的含量低于菌株3，从物质和能量分配的角度推测可能的原因是：虽然SNO1和SNZ1的表达能够提高磷酸吡哆醛的含量，进而提高谷氨酸脱羧酶GdB的活性，但是导至Y氨基丁酸生产能力下降。生物学试卷第8页（共8页）